ALK基因易位导致ALK融合基因的表达(下文中提及的ALK阳性是指ALK基因易位或ALK融合基因表达),这一分子生物学基础决定了检测ALK基因融合可以在多个分子水平上进行,包括荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)在DNA水平上检测ALK基因易位;即时荧光定量聚合酶链反应(real time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测ALK融合mRNA;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测ALK融合蛋白表达;二代测序(next-generation sequencing, NGS)技术检测DNA水平上的易位序列或mRNA水平上的融合序列。
一、ALK检测的临床意义
1、伴有ALK基因融合的不可手术晚期非小细胞肺癌患者接受 ALK 抑制剂治疗,客观缓解率和PFS显著优于含铂化疗,并改善患者的生活质量。反之,ALK基因融合阴性患者并不能从ALK抑制剂治疗中获益。
2、伴有ALK基因融合的非小细胞肺癌手术患者与预后差相关,无复发生存时间(recurrence-free survival,RFS)较短。
二、ALK检测的适用人群
1.所有经病理学诊断为肺浸润性腺癌(包括含腺癌成分)患者均需进行ALK检测。
2.经活检组织病理学诊断为非腺癌的晚期非小细胞肺癌患者推荐进行ALK检测。
三、ALK靶向药物
1.一代ALK抑制剂克唑替尼和二代ALK抑制剂阿来替尼均可用于晚期ALK阳性非小细胞肺癌患者的一线治疗,阿来替尼优先。
2.二代ALK抑制剂阿来替尼和塞瑞替尼均用于晚期ALK阳性非小细胞肺癌患者经克唑替尼治疗耐药后的二线治疗。
四、ALK检测基因异常类型
初治患者进行 ALK基因异常检测时,必须检测是否存在基因易位/融合/表达,可进行ALK融合变体亚型检测及易位丰度检测。目前至少发现了 20多种EML4-ALK融合变体亚型,其中,最常见的是 EML4的变体1[v1:M外显子13与ALK的外显子20融合(E13;A20)]和变体 3v3a/b[外显子 6a/b 与 ALK 的外显子 20 融合(E6a/b;A20)],这两种变体类型约占总体的60%。目前临床实践主要依据患者有无ALK基因易位/融合/表达来决定是否使用ALK抑制剂。因此目前我们强烈推荐初治患者进行ALK基因异常检测时,必须检测是否存在基因易位/融合/表达,可进行ALK融合变体亚型检测及易位丰度检测。针对ALK抑制 剂耐药患者,需要考虑ALK获得性耐药突变的相关检测。
五、ALK检测方法
Ventana-D5F3 IHC、FISH、RT-PCR、NGS均可用于ALK基因融合检测,判读标准参照试剂盒说明书。
六、ALK检测的标本类型:
检测标本首先推荐选择手术切除或活检获取的石蜡包埋的肿瘤组织标本进行 ALK检测;如果手术样本保存时间过长(3年以上)、未经过规范化前处理的标本可影响检测结果。晚期肺癌患者无法获取肿瘤组织标本时,细胞学样本包括细胞学穿刺标本或胸水细胞块等经病理学评估肿瘤细胞量满足需要的,推荐用于 ALK检测。对于少数晚期非小细胞肺癌患者无法获得组织学或细胞学样本的,专家共识建议尝试使用血液/脑脊液进行ALK检测。
七、ALK检测策略优化:
1.优先应用Ventana-D5F3 IHC进行ALK检测。ALK Ventana-D5F3 IHC快速、经济、操作简单,且具有较高的灵敏度(100%)及特异度(98%)。
2.当和其他基因(如EGFR、ROS1等)一起检测时,可以联合FISH和RT-PCR,或进行RT-PCR或NGS多基因检测。
3. 当怀疑检测标本有质量问题时,优先应用FISH检测。
4.临床病理特征可用于优先检测项目及方法的选择。ALK阳性非小细胞肺癌患者具有一定的临床病理特征,ALK基因融合更常见于年轻(中位年龄55岁)、非吸烟、富含胞内黏液的实体型肺腺癌患者中,男女患者比例相近,且常与其他驱动基因突变如EGFR、KRAS、ROS1等互斥。我们可以依据患者临床病理特征进行优先检测项目及检测方法的选择,例如具备上述临床病理特征的患者我们可以优先进行ALK Ventana-D5F3 IHC检测。
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